核因子相關(guān)κB結(jié)合蛋白65ELISA試劑盒

檢測原理

試劑盒特點(diǎn)

• 特異性強(qiáng)：采用高特異性的雙抗體夾心設(shè)計，捕獲抗體與檢測抗體均針對目標(biāo)蛋白的不同表位，可特異性識別目標(biāo)蛋白，有效避免樣本中其他蛋白、雜質(zhì)的交叉反應(yīng)，檢測特異性高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可有效區(qū)分目標(biāo)蛋白與其他同源蛋白，適配復(fù)雜樣本檢測需求；

• 靈敏度高：優(yōu)化抗體濃度與孵育條件，檢測靈敏度可達(dá)pg/ml級別，可精準(zhǔn)檢測樣本中微量的目標(biāo)蛋白，能夠捕捉到樣本中目標(biāo)蛋白的細(xì)微濃度變化，滿足低表達(dá)樣本的檢測需求，適配炎癥反應(yīng)等微量蛋白調(diào)控相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，尤其適用于NF-κB信號通路活化相關(guān)的微量蛋白檢測；

• 操作簡便：試劑盒包含檢測所需全部試劑，無需額外配制復(fù)雜試劑，實(shí)驗(yàn)步驟清晰，全程可在酶標(biāo)板上完成，孵育時間優(yōu)化設(shè)計，無需特殊實(shí)驗(yàn)技能，經(jīng)簡單培訓(xùn)即可上手操作，適配常規(guī)實(shí)驗(yàn)室及科研新手使用，大幅節(jié)省實(shí)驗(yàn)時間與人力成本；

• 檢測范圍寬：標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度合理，檢測范圍覆蓋pg/ml至ng/ml級別，可適配不同濃度范圍的樣本檢測，無需對樣本進(jìn)行過度稀釋，減少稀釋過程帶來的誤差，同時可避免因樣本濃度過高或過低導(dǎo)致的檢測結(jié)果偏差，提升實(shí)驗(yàn)重復(fù)性；

• 兼容性好：可適配血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等多種常見科研樣本類型，無需復(fù)雜樣本預(yù)處理，同時兼容常規(guī)酶標(biāo)儀，無需額外配備專用檢測設(shè)備，適配多類型科研實(shí)驗(yàn)設(shè)計，尤其適用于炎癥性腸病、腫瘤等相關(guān)疾病的樣本檢測研究，可與細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)協(xié)同使用，為NF-κB信號通路相關(guān)研究提供全面支撐；

• 穩(wěn)定性高：試劑盒試劑經(jīng)嚴(yán)格質(zhì)量控制，批內(nèi)與批間變異系數(shù)低，試劑穩(wěn)定性好，冷藏儲存條件下可穩(wěn)定保存，避免因試劑不穩(wěn)定導(dǎo)致的檢測結(jié)果波動，保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的重復(fù)性和可靠性，適合長期科研實(shí)驗(yàn)使用。

適用實(shí)驗(yàn)場景

• 信號通路研究：NF-κB信號通路活化機(jī)制研究，檢測不同干預(yù)條件（如藥物處理、細(xì)胞刺激、基因調(diào)控）下，樣本中目標(biāo)蛋白的含量變化，探究其在信號通路中的調(diào)控作用，為信號通路機(jī)制研究提供精準(zhǔn)定量數(shù)據(jù)支撐；

• 疾病機(jī)制研究：炎癥性疾病、腫瘤、自身免疫性疾病等相關(guān)機(jī)制研究，檢測病變組織、血清樣本中目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平，分析其與疾病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)聯(lián)，為疾病病因探究及防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)；

• 藥物研發(fā)實(shí)驗(yàn)：抗炎、抗腫瘤、信號通路抑制劑等藥物的篩選與藥效評估，檢測藥物干預(yù)后樣本中目標(biāo)蛋白的含量變化，判斷藥物對目標(biāo)蛋白的調(diào)控作用，為藥物研發(fā)、劑量優(yōu)化提供體外檢測平臺；

• 基礎(chǔ)科研實(shí)驗(yàn)：細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，如細(xì)胞刺激后目標(biāo)蛋白表達(dá)變化檢測、基因沉默/過表達(dá)后目標(biāo)蛋白含量檢測，適配多種科研設(shè)計，為實(shí)驗(yàn)結(jié)論提供定量支撐；

• 樣本篩查實(shí)驗(yàn)：大批量科研樣本的目標(biāo)蛋白快速篩查，可同時檢測多個樣本，高效完成定量分析，適配大規(guī)模實(shí)驗(yàn)研究，節(jié)省實(shí)驗(yàn)時間，提升實(shí)驗(yàn)效率。

試劑盒組成與儲存

（一）試劑盒組成

（二）儲存條件

• 試劑盒未開封時：置于2-8℃冷藏儲存，避免冷凍、高溫（超過30℃）及強(qiáng)光直射，嚴(yán)禁反復(fù)凍融，確保試劑活性，未開封試劑盒保質(zhì)期為12個月；

• 試劑盒開封后：包被抗體微孔板密封后2-8℃冷藏保存，避免受潮、污染，建議1個月內(nèi)使用完畢；酶標(biāo)檢測抗體、底物液、終止液等試劑，密封后2-8℃冷藏，開封后建議2周內(nèi)使用完畢；

• 標(biāo)準(zhǔn)品：凍存于-20℃以下，避免反復(fù)凍融，溶解后可在2-8℃冷藏保存3-5天，長期保存需分裝后凍存；

• 洗滌液（濃縮型）：2-8℃冷藏保存，開封后密封，避免污染，稀釋后使用，稀釋后的洗滌液可在4℃保存1周；

• 運(yùn)輸條件：采用冰袋低溫運(yùn)輸（2-8℃），運(yùn)輸過程中做好防震、防破損措施，運(yùn)輸時間不超過48小時，接收后立即檢查試劑盒完整性，快速轉(zhuǎn)入2-8℃冷藏儲存。

實(shí)驗(yàn)操作步驟

注意事項(xiàng)

• 本試劑盒僅用于科研，嚴(yán)禁用于臨床診斷、診療及其他非科研用途，實(shí)驗(yàn)過程中需嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范，避免試劑污染、樣本交叉污染，同時遵循科研實(shí)驗(yàn)倫理要求，規(guī)范處理廢棄試劑、樣本及實(shí)驗(yàn)耗材；

• 實(shí)驗(yàn)前需仔細(xì)閱讀本說明書，嚴(yán)格按照操作步驟、孵育時間、溫度及試劑用量進(jìn)行操作，避免因操作不當(dāng)導(dǎo)致檢測結(jié)果偏差，尤其注意孵育溫度的控制（嚴(yán)禁低于35℃或高于39℃），適配試劑反應(yīng)特性；

• 所有試劑使用前需恢復(fù)至室溫并輕輕搖勻，避免劇烈震蕩，酶標(biāo)檢測抗體、底物液等試劑避免反復(fù)凍融，防止試劑活性下降；濃縮洗滌液需按比例稀釋后使用，未稀釋的濃縮液不可直接加入微孔板；

• 樣本處理：血清、血漿樣本需離心去除雜質(zhì)（3000rpm，10分鐘），避免溶血、渾濁樣本使用；組織勻漿樣本需按常規(guī)方法制備，離心去除沉淀后取上清液用于檢測；細(xì)胞培養(yǎng)上清液需離心去除細(xì)胞碎片，確保樣本純凈，避免雜質(zhì)影響檢測結(jié)果；

• 加樣操作：移液器需校準(zhǔn)，加樣時避免氣泡產(chǎn)生，加樣量精準(zhǔn)控制，不同樣本、試劑需使用專用移液器吸頭，避免交叉污染；加樣后需輕輕震蕩混勻，確保試劑與樣本充分接觸；

• 洗滌操作：洗滌次數(shù)、洗滌液用量需嚴(yán)格遵循說明書要求，避免洗滌不徹di（導(dǎo)致背景信號過高）或過度洗滌（導(dǎo)致抗原-抗體復(fù)合物脫落，檢測結(jié)果偏低）；zui后一次洗滌后需徹di拍干殘留液體，避免殘留洗滌液稀釋底物液；

• 顯色反應(yīng)：底物液需避光保存，顯色過程需避光孵育，避免強(qiáng)光照射導(dǎo)致顯色異常；顯色時間可根據(jù)實(shí)際顯色情況適當(dāng)調(diào)整，但不可超過25分鐘，防止顯色過度影響檢測結(jié)果；

• 終止與檢測：終止液加入后需立即測定OD值，避免放置時間過長導(dǎo)致溶液顏色褪色，影響檢測準(zhǔn)確性；酶標(biāo)儀需提前校準(zhǔn)，測定時波長設(shè)置準(zhǔn)確（492nm），確保檢測數(shù)據(jù)可靠；

• 實(shí)驗(yàn)所用器材（移液器、離心管、微孔板等）需清潔、無菌，避免污染；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，廢棄試劑、樣本及實(shí)驗(yàn)耗材需經(jīng)滅菌處理后丟棄，避免生物污染，符合科研實(shí)驗(yàn)安全規(guī)范；

• 若檢測結(jié)果異常（如標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差、樣本OD值超出檢測范圍），可排查試劑活性、樣本處理、操作步驟等因素，針對性優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件（如重新稀釋樣本、更換試劑），必要時重復(fù)實(shí)驗(yàn)，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠。

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